凝膠過濾是分離金納米粒子標(biāo)記結(jié)合物的最佳方法。

透析會(huì)產(chǎn)生更多變化的結(jié)果；在我們的實(shí)驗(yàn)室中，嘗試通過透析將未結(jié)合的金納米粒子與蛋白質(zhì)和抗體結(jié)合物分離，導(dǎo)致金降解，有時(shí)還會(huì)導(dǎo)致蛋白質(zhì)大量損失；因此，我們不推薦通過透析來分離偶聯(lián)物。

膜離心可能有用，特別是在標(biāo)記非常大的蛋白質(zhì)時(shí)；截留分子量為 50,000 或 100,000 的微量濃縮器將允許 undecagold 和 Nanogold® 穿過膜。

選擇您的凝膠過濾介質(zhì)

選擇一種凝膠，它可以最好地分離金結(jié)合物和過量存在的組分：這將是一種凝膠，其中結(jié)合物的 MW 接近 MW 分級范圍的頂部，過量的試劑（無論是金納米顆?；蛭礃?biāo)記的較小分子）接近該范圍的底部。注意：如果您擔(dān)心聚集的可能性，請選擇 MW 范圍上限明顯高于金納米粒子偶聯(lián)物 MW 的凝膠。

Nanogold® 標(biāo)記的 Fab' 片段的分離示例如下所示：

所需產(chǎn)物（灰色陰影）與較大的 F(ab') ₂綴合物和過量未結(jié)合的 Nanogold® 分離。要獲得更高的純度，應(yīng)將 12-14 級分合并并再次分離。

要對凝膠或印跡進(jìn)行染色以獲得清晰、快速的肉眼結(jié)果：

• 銀增強(qiáng)方案：
  使用 LI Silver 對 Nanogold® 標(biāo)記的分子進(jìn)行凝膠染色

• 使用GoldEnhance Blots
  增強(qiáng) 黃金 在許多情況下，黃金顯影劑優(yōu)于白銀。