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RNA 定量的最佳技術(shù)介紹

更新時間:2023-10-31      點擊次數(shù):1039

RNA 和 DNA 定量(有時稱為核酸定量)可確定給定樣品中 RNA 或 DNA 的濃度。定量過程的一部分可能涉及處理混合物樣品,可能含有多種污染物,例如蛋白質(zhì)、其他核酸或有機化合物。

什么是RNA定量?

有多種實驗方法可用于 RNA 定量。其中包括用于 RNA 定量、熒光或分光光度測量的 PCR 方法。 

用于RNA 定量的分光光度法和熒光法比 PCR 等方法具有多個優(yōu)勢。使用光學(xué)方法進行 RNA 定量不需要任何額外的樣品制備,非常經(jīng)濟高效且耗時較少。雖然基于 PCR 的方法可以提供良好的靈敏度,但它們更復(fù)雜且執(zhí)行成本更高,并且只有極低 RNA 濃度的 RNA 定量才需要這種水平的靈敏度。 

分光光度法和熒光分析

分光光度測量提供了一種穩(wěn)健且直接的 RNA 定量方法。RNA 定量通常在 260 nm 下進行,同時還會收集 UV 范圍內(nèi)的一系列波長。大多數(shù)蛋白質(zhì)、小有機分子和核酸在該區(qū)域具有很強的吸收和發(fā)射特征,從而可以對 RNA 進行定量并識別潛在污染物。

在已知光程下測量的樣品吸光度與該樣品的濃度成正比。在特定波長(RNA 為 260 nm)下透過樣品的光量可用于 Beer-Lambert 方程來計算感興趣樣品的濃度,在本例中用于 RNA 定量。還必須知道感興趣物種的摩爾吸收系數(shù)。

計算摩爾吸收系數(shù)相對簡單。由于給定波長下的吸光度和光程之間的關(guān)系與濃度成線性比例,因此可以測量參考樣品的一系列給定稀釋度。通過對這些數(shù)據(jù)點進行線性擬合,可以計算摩爾吸收系數(shù)并用于將來的量化。對于 DNA 和 RNA 等充分表征的樣品,系數(shù)是已知的并包含在分析軟件中。 

RNA 定量也可以通過熒光測量來進行。熒光測量比基于吸光度的測量具有更高的靈敏度。已經(jīng)開發(fā)出專為激發(fā)感興趣的分析物而開發(fā)的檢測試劑盒。即使在復(fù)雜混合物或存在污染物的情況下,這些也可用于 RNA 定量。樣品的熒光量也與濃度成正比,并且可以通過使用已知濃度的類似樣品的標(biāo)準曲線來定量。 

用于 RNA 定量的分光光度計

DeNovix 是生物技術(shù)專家,擁有多種針對 RNA 定量進行優(yōu)化的儀器,包括 DS-11 系列和 QFX 熒光計,這些儀器在設(shè)計時考慮了 RNA 定量的一些復(fù)雜性。

QFX 熒光計具有出色的靈敏度和特異性,適用于可能涉及高度復(fù)雜的混合物或需要在極低濃度下進行 RNA 定量的挑戰(zhàn)性 RNA 定量情況。它配備了四個光源和帶有敏感光電二極管的發(fā)射通道,所有這些都可以選擇用于藥理學(xué)應(yīng)用的安全審計跟蹤記錄。 

DS -11 系列是一款適用于常規(guī)樣品和珍貴樣品的微量儀器。DS-11 可以處理小至一微升的體積,并在最寬的可用動態(tài)范圍內(nèi)進行定量。DS-11 還配備了易于使用的軟件,可以顯示全光譜掃描以及通常用作 RNA 定量和質(zhì)量控制一部分的 260/280 和 260/230 比率。


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