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免疫組織化學(xué)工作流程

更新時間:2023-11-22      點擊次數(shù):577

VECTASTAIN ®  ABC 系統(tǒng)使我們成為免疫組織化學(xué) (IHC) 和免疫細(xì)胞化學(xué) (ICC) 領(lǐng)域的先驅(qū),并且我們在這些領(lǐng)域仍然是值得信賴的品牌。我們的產(chǎn)品因其高靈敏度、低背景、可靠性、再現(xiàn)性和價值定價而受到好評。我們提供許多不同的檢測系統(tǒng)來適應(yīng)廣泛的實驗優(yōu)先事項。

為您的 IHC 檢測選擇合適的試劑是優(yōu)化實驗方案的重要組成部分。 Vector Laboratories 是您 IHC 工作流程每個步驟中優(yōu)質(zhì)標(biāo)記和檢測產(chǎn)品的資源。

載玻片準(zhǔn)備

· 大化組織切片在載玻片上的保留和粘附。

· 劃分和隔離各個部分以減少試劑使用或進(jìn)行離散處理。

抗原修復(fù)

使用規(guī)定的 pH 值和鹽溶液提高醛固定制劑的組織抗原性(“免疫反應(yīng)性")。醛固定(例如福爾馬林)和石蠟包埋過程中的熱暴露相結(jié)合會使表位難以檢測。在抗原修復(fù)過程中,組織會受到緩沖溶液和高溫的組合處理,這會導(dǎo)致蛋白質(zhì)發(fā)生構(gòu)象變化,從而暴露抗原以供檢測。

淬火/阻斷

使用封閉溶液減少或消除組織切片和細(xì)胞制劑上不需要的背景(非特異性)染色。非特異性染色可能是由內(nèi)源酶或組織成分引起的,包括內(nèi)源酶活性、Fc 受體的存在或檢測試劑與組織或細(xì)胞蛋白和其他大分子的相互作用。根據(jù)陰性對照切片的結(jié)果選擇封閉溶液。

一抗/凝集素

使用經(jīng)過驗證的特定標(biāo)記物來識別和定位細(xì)胞或組織制劑中的靶蛋白抗原或糖蛋白部分。選擇一抗或凝集素時,請考慮組織種類和組織制備方法(例如固定),以確保與靶標(biāo)特異性結(jié)合。

二抗

選擇高度純化和最佳偶聯(lián)的檢測試劑以滿足檢測條件,例如一抗種類、組織種類、靶標(biāo)豐度和易用性(濃縮或即用型)。

三級試劑

如果需要,提高檢測的靈敏度,以可視化弱或短暫表達(dá)、上調(diào)或未知(例如,基因敲入研究)抗原。

底物/顯色劑

使用酶特異性顯色顯色來可視化您的目標(biāo)蛋白抗原及其細(xì)胞和/或細(xì)胞外定位和相對表達(dá)水平。選擇符合您顏色偏好且與其他系統(tǒng)試劑兼容的酶底物(例如復(fù)染劑、封固劑和其他底物(如果多重檢測))。

復(fù)染

使用對比核染色來澄清異質(zhì)形態(tài)結(jié)構(gòu)內(nèi)的靶抗原信號。這有助于闡明組織中的細(xì)胞結(jié)構(gòu)和特定染色模式。選擇與酶底物形成對比且與底物和封固劑化學(xué)相容的復(fù)染劑(藍(lán)色、綠色或紅色)。

蓋玻片/封片

保留目標(biāo)抗原染色劑以供短期或無限期存儲和存檔。選擇與您的底物和復(fù)染劑兼容的封固劑。使用非水封固劑封固要存檔的載玻片,或使用水性封固劑保存長達(dá)數(shù)年。


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